ISOLEMENT ET IDENTIFICATION DES CHAMPIGNONS PRODUCTEURS D’ENZYMES.

Abstract

L'objectif visé lors de cette étude, cible l‘isolement, l‘identification, l‘optimisation, et la caractérisation des champignons producteurs d‘enzymes hydrolytiques. Les quarante champignons isolés d'un sol riche en matière organique ont été criblés pour la production d'enzymes extracellulaires. Ils ont été sélectionnés sur la base de leur potentiel hydrolytique de la cellulose, du xylane, de l'amidon, de la caséine et des plumes de poulet. L‘ordre des activités enzymatiques avec pourcentage pour les microorganismes isolés est : cellulolytique > xylanolytique > amylolytique > protéolytique > kératinolytique. Les souches dont leurs résultats était positif lors du premier criblage ont été testées sur milieu liquide et ont été évaluées quantitativement. Les activités les plus élevées de CMCase (5,10 UI/ml) et de xylanase (98,25 UI/ml) ont été obtenues à partir de Trichoderma sp. Mtr6. Pour l'amylase, l'activité maximale (44,67 UI/ml) a été enregistrée par l'Aspergillus sp. BAS2. Penicillium sp. Bpn3 a montré une activité protéasique de 3,80 UI/ml. Penicillium sp. BAS3 est la plus productrice de kératinase avec (2,18 UI/ml). Après le criblage, La CMCase a été privilégiée pour compléter ce travail, et cela par les isolats les plus performants à savoir : Mtr6, BAS1 et BbV1. Ils ont été identifiés comme T. afroharzianum, A. foetidus. et S. kiliense respectivement. Les résultats de l'étude OFAT ont révélé que le temps d'incubation, l'humidité, la température et la taille de l'inoculum ont significativement influencé la production d'endoglucanase, l'optimum de ces paramètres sont respectivement : (6 jours, 90%, 24°C, 107 spores/g), (7 jours, 90%, 28°C et 107 spores/g), (8 jours, 90%, 26°C et 105 spores/g). Le plan de Box Benckhen a été utilisé pour améliorer la production d'endoglucanase de S kiliense. BbV1 en étudiant l'effet d'interaction entre les paramètres sélectionnés (temps d'incubation, humidité, température, et taille de l'inoculum). La validation du modèle RSM par la souche S. kiliense a permis d'obtenir une activité maximale de 15,03U/gds avec :10 jours,60%,24°C et 1,9 105sp/g respectivement L‘activité optimale de CMCase semi purifiée en utilisant l‘ultrafiltration pour les trois souches est observé à 60°C et pH 4,8 pour les deux souches : T afroharzianum. Mtr6 et A foetidus. BAS1 et un optimum d‘activité de S kiliense BbV1 à 40°C et pH 5. Pour T afroharzianum, les ions FeSO4 et Ag2SO4 augmentent l‘activité 114,32% et 100, 39% respectivement. La présence de l‘ion FeSO4 stimule l‘activité avec 111,57% par A foetidus.BAS1 et l‘addition d‘AgSO4 augmente l‘activité avec (107,11%) par S kiliense BbV1, tandis que l'effet de l'EDTA pour ces deux souches (65,09%) et (33,61%) respectivement inhibe la CMCase. La thermostabilité révélée stable pendant (165,90,270 min) pour les souches Mtr6, BAS1et BbV1 respectivement. L‘endoglucanase possède plus d‘affinité pour le CMC (carboxymethyl cellulose) avec une activité de 100% pour les trois souches.